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己糖激酶試劑盒 糖酵解系列-常備現(xiàn)貨
簡(jiǎn)要描述:

HK(EC 2.7.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是葡萄糖分解過(guò)程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶,催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。
己糖激酶試劑盒 糖酵解系列-常備現(xiàn)貨

  • 產(chǎn)品型號(hào):BJ6005
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
  • 更新時(shí)間:2025-07-17
  • 訪  問(wèn)  量:214
詳情介紹


己糖激酶(hexokinase,HK)試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 /48


正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

HK(EC 2.7.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是葡萄糖分解過(guò)程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶,催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。

測(cè)定原理:

HK 催化葡萄糖合成 6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫生成 NADPH NADPH 340nm 有特征吸收峰。

己糖激酶試劑盒   糖酵解系列-常備現(xiàn)貨

組成:

產(chǎn)品名稱(chēng)

BJ6005-50T/48S

Storage

提取液:液體

60ml

4℃

試劑一:液體

30ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃

試劑三:液體

5 ml

4℃

試劑四:粉劑

1

-20℃

試劑五:粉劑

1

-20℃

試劑六:粉劑

1

-20℃

說(shuō)明書(shū)

一份

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 30ml 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 4ml 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前加入 2ml 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前加入 250μl 試劑一和 250μl 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)


自備儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣本的前理:

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(ml) 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml) 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,加入 1ml 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑一、二、三、四和五 37℃(哺乳動(dòng)物) 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘。

3、加樣表:

試劑名稱(chēng)(μl)

測(cè)定管

試劑一

400

試劑二

400

試劑三

80

試劑四

80

試劑五

40

試劑六

8

樣本

30

將上述試劑按順序加入 1 ml 石英比色皿中,立即混勻,加樣本的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄 20秒時(shí)的初始吸光度A1 5 20 秒時(shí)的吸光度 A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意事項(xiàng):

1、為了減小操作誤差,建議將試劑一、二、三、四、五按比例配成混合液,預(yù)熱 10min,取 30μl 樣本+8μl試劑六+1ml 混合液,混勻后按照上述步驟檢測(cè)。

2、不同勻漿組織中 HK 活力不一樣,做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做 1-2 只預(yù)試,若ΔA>0.5,則說(shuō)明組織活力太高,必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),或縮短反應(yīng)時(shí)間至 2min,使 ΔA<0.5,以提高檢測(cè)靈敏度。

HK 活性計(jì)算:

1、血清(漿)HK 活性

單位的定義:每毫升血清(漿)在每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

HK(nmol/min/ml)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=1113×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 HK 活性

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

HK(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1113×ΔA÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g 組織每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

HK(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1113×ΔA÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

HK(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.226×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,1.038×10-3 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.03 ml;V 樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

己糖激酶試劑盒   糖酵解系列-常備現(xiàn)貨



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