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二氫黃酮醇還原酶（Dihydro flavonol reductase，DFR）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關鍵酶，在決定植物的花色、葉色、果色和其他經濟器官的色澤及其營養品質方面起著重要作用。
二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產生兒茶素，可與香cao醛縮合形成紅色化合物，在 500nm 處有特征吸收峰。
產品名稱 | BD6020-100T/48S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 12ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 1.5ml | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑四：液體 | 30ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
試劑三：臨用前加 2ml 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
研缽、低溫離心機、震蕩儀、氮吹儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、水浴鍋、無水乙醇、乙酸乙酯。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 500nm。
2、操作表
對照管 | 測定管 | |||
酶液（μl） | 40 | 40 | ||
試劑一（μl） | 140 | 120 | ||
試劑二（μl） | 20 | |||
試劑三（μl） | 20 | 20 | ||
混勻，30℃反應 30min | ||||
乙酸乙 | 200 | 200 | ||
37℃震蕩 10min，取上層溶液，N2 吹干 | ||||
無水乙醇（μl） | 100 | 100 | ||
充分震蕩 | ||||
試劑四(μl) | 300 | 300 | ||
混勻，25℃靜置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板中測定 500nm 處吸 光值A。分別記為A 對照管和A 測定管，△A=A 測定管-A 對照管 | ||||
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999
（1） 按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在 30℃，pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2） 按照樣本質量計算
酶活性定義：在 30℃，pH7.5 條件下，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR 活性（mmol/min/g 鮮重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V 反總：反應總體積，1ml；V 樣：反應體系中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質量，g；T：反應時間，30min
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0092x+0.0002，R2=0.999
（1） 按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在 30℃，pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR 活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0092×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2） 按照樣本質量計算
酶活性定義：在 30℃，pH7.5 條件下，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產生 1mmol 兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR 活性（mmol/min/g 鮮重）= （△A-0.0002）÷0.0092×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V 反總：反應總體積，1ml；V 樣：反應體系中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質量，g；T：反應時間，30min
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